石蠟切片(paraffinsection)組織學(xué)常規(guī)制片技術(shù)中最為廣泛應(yīng)用的方法。不僅用于觀察正常細(xì)胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，也是病理學(xué)和法醫(yī)學(xué)等學(xué)科用以研究、觀察及判斷細(xì)胞組織的形態(tài)變化的主要方法，而且也已相當(dāng)廣泛地用于其他許多學(xué)科領(lǐng)域的研究中。教學(xué)中，光鏡下觀察切片標(biāo)本多數(shù)是石蠟切片法制備的?；畹募?xì)胞或組織多為無(wú)色透明，各種組織間和細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)之間均缺乏反差，在一般光鏡下不易清楚區(qū)別出;組織離開機(jī)體后很快就會(huì)死亡和產(chǎn)生組壞死，失去原有正常結(jié)構(gòu)，因此，組織要經(jīng)固定、石蠟包埋、切片及染色等步驟以免細(xì)胞組織死亡，而能清晰辨認(rèn)其形態(tài)結(jié)構(gòu)。
　　基本技術(shù)
　　說明
　　包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與貼片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。一般的組織從取材固定到封片制成玻片標(biāo)本需要數(shù)日，但標(biāo)本可以長(zhǎng)期保存使用，為顯微玻片標(biāo)本。
　　取材
　　應(yīng)根據(jù)要求選取材料來(lái)源及部位。例如植物細(xì)胞有絲分裂多選取洋蔥根尖，細(xì)胞分裂快又便于切取;豬的肝小葉邊界清晰明確;耳蝸以豚鼠的內(nèi)耳易于定位和剝離。材料必須新鮮，擱置時(shí)間過久則產(chǎn)生蛋白質(zhì)分解變性，導(dǎo)致細(xì)胞自溶及細(xì)菌的滋生，而不能反映組織活體時(shí)的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
　　固定
　　用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)藥液--固定液浸漬切成小塊的新鮮材料，迅速凝固或沉淀細(xì)胞和組織中的物質(zhì)成分、終止細(xì)胞的一切代謝過程、防止細(xì)胞自溶或組織變化，盡可能保持其活體時(shí)的結(jié)構(gòu)。固定能使組織硬化，有利于切片的進(jìn)行，而且也有媒浸作用，有利于組織著色。固定液的種類很多，其對(duì)組織的硬化收縮程度以及組織內(nèi)蛋白質(zhì)、脂肪、糖類等物質(zhì)的作用各不相同。例如純酒精可固定肝糖而能溶解脂肪，甲醛能固定一般組織，但溶解肝糖和色素。固定液可分為單一固定液及混合固定液。前者有甲醛(乙醛、福爾馬林)、酒精、醋酸或冰醋酸、重鉻酸鉀等，單一固定液不能固定細(xì)胞中的所有成分;混合固定液可以互補(bǔ)不足，常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa液(配方見有關(guān)技術(shù)書籍)。因此，應(yīng)根據(jù)所要顯示的內(nèi)容來(lái)選擇適宜的固定液。10%福爾馬林(4%甲醛)或10%磷酸緩沖福爾馬林是病理切片常規(guī)使用的固定液，不僅適用于常規(guī)H精-伊紅)染色，還可以用于組織學(xué)有關(guān)的其他技術(shù)的切片染色。固定液的用量通常為材料塊的20倍左右，固定時(shí)間則根據(jù)材料塊的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，可以從1小時(shí)至數(shù)天，通常為1小時(shí)至24小時(shí)。
　　洗滌與脫水
　　固定后的組織材料需除去留在組織內(nèi)的固定液及其結(jié)晶沉淀，否則會(huì)影響后期的染色效果。該步驟稱作洗滌多數(shù)用流水沖洗;使用酒精或酒精混合液固定的組織，則不必洗滌，可直接進(jìn)行脫水。固定后或洗滌后的組織內(nèi)充滿水分，若不除去水分則無(wú)法進(jìn)行以后的透明、浸蠟與包埋處理，原因在于透明劑多數(shù)是苯類，苯類和石蠟均不能與水相融合，水分不能脫盡，苯類無(wú)法浸入。酒精為常用脫水劑，它既能與水相混合，又能與透明劑相混。為了減少組織材料的急劇收縮，應(yīng)使用從低濃度到高濃度遞增的順序進(jìn)行，通常從30%或50%酒精開始，經(jīng)70%、85%、95%直至純酒精(無(wú)水乙醇)，每次時(shí)間為1~數(shù)小時(shí)，如不能及時(shí)進(jìn)行各級(jí)脫水，材料可以放在70%酒精中保存，因高濃度酒精易使組織收縮硬化，不宜處理過久。正丁醇、叔丁醇、丙酮及二氧陸環(huán)等也可做脫水劑。